乙肝病毒大蛋白检测技术的发展

　　早在上个世纪 80 年代，关于大蛋白前S蛋白与乙肝病毒复制的关系已经引起了人们的广泛注意，检测的意义得到科研领域公认。但是检测前S抗原的手段缺乏，临床应用不广。到90年代，从蛋白组成上认为前S1是HBV大蛋白所独有的片断，因此它作为乙肝病毒复制的新标志一直是乙肝检测领域研究的热点, 关于前S区的研究主要是将前S1 和前S2作为两个独立的单元进行研究［7］。

    90年代中期，我国已经有商品化的前S1定性检测试剂，但只能检测到微弱的抗pre-S1抗体的产生。90年代末，军事医学科学院马贤凯等人使用基因重组的前S抗原制备多抗组装成试剂盒，在大、小三阳患者检出率没有显著的差异，且与HBV复制的相关性也不够高，没有见后来有相关的文章发表［8］。

   此外由于HBV-LP表达具有很强的细胞内滞留性，因此HBV-LP前S抗原难以体外重组表达，同时该HBV-LP极容易降解，因此将HBV-LP前S区作为一个整体对其蛋白功能研究相对较少。国内近期才有完整表达前S区抗原成功［9］。而在国外，对于S区抗原检测的研究，开始于1984年，德国科学家 Klaus H.等人使用乙肝感染者的血清分离出乙肝病毒颗粒，分离出一株单抗，该单抗后来确定为前S1区的线性表位AA31-33区段的单抗，没有在临床诊断中应用。从90年代到现在，针对前S区蛋白的整体性构象型蛋白研究日益受到重视［10］。

   德国法兰克福州吉森大学的Bruss V实验室研究证明大蛋白上的前S区 AA99-169 （横跨部分前S1和前S2）形成一个环状，具有表面抗原众多的免疫表位［11］，其中Arg 103和Ser 124之间的pre-S序列对于HBV的形成具有重要功能，而这个区段也是横跨前S1和前S2的。而由大蛋白组装成的亚病毒颗粒能够反式激活病毒继续复制也有相关乙肝鸭模型证实。这个对于临床具有实际的意义，在临床上，一定比例的小三阳病人抗病毒治疗后［DNA阴性（低拷贝数）但是存在亚病毒颗粒（前S抗原阳性）］容易停药反跳之间的关联有新的启示。 

　　对于 HBV 外膜蛋白的深入研究，发现大蛋白在完整病毒外壳组装过程中起着决定性作用［12］。整个前 S 区都暴露在病毒颗粒的表面，大蛋白在穿越内质网时需要形成双重拓扑结构，大蛋白的折叠使前S区形成一个结构型依赖的区域。表位的构成方式至少有两种：①线性表位。②构象表位。病毒抗原的免疫检测的研究中，大多数都采用病毒的部分基因重组抗原或合成的多肽制作的单抗。近年来，人们逐渐认识到合成的多肽一般只具有线性表位，而不具有抗体所识别的构象型表位。

   当病毒的优势抗原表位是具有立体空间构象型的抗原表位时，采用基因重组或合成肽的抗原制作的单抗其检测病毒抗原的灵敏度必定受到影响［13］，所以最好的办法是采用病毒样颗粒上的天然抗原决定簇或者能模拟其结构的重组蛋白来制作出针对其构象型表位的单克隆抗体。因此 , 针对HBV-LP拓扑结构的特异性单抗是检测HBV-LP的较好选择。

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