HBV-DNA荧光定量PCR检测的临床意义

【摘要】  目的：荧光定量聚合酶反应(FQ-PCR)检测血清中乙型肝炎病毒(HBV-DNA)的临床意义。方法：用荧光探针技术相结合所产生的实时荧光定量聚合酶反应。结果：150例乙型肝炎标本中，有91例大三阳(HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+)，患者血清HBV-DNA阳性率100%，平均浓度2.8×106 Copies/ml；有19例小二阳(HBsAg+, HBcAb+)，患者血清HBV-DNA阳性94.7%，平均浓度4.3×l05 Copies/ml；有40例小三阳(HBsAg+, HBeAb+, HBcAb+)患者血清HBV-DNA阳性率77.5%，平均浓度1. 2×104Copies/ml。结论：FQ-PCR是了解HBV-DNA在体内复制和判断疗效的有利手段，并具有快速、特异、灵敏等优点，可真实反应HBV-DNA复制情况及病情变化，对乙肝临床诊断及治疗有较大的指导意义。

【关键词】  乙型肝炎病毒 实时荧光定量聚合酶反应 乙肝标志物

　　乙肝病毒血清标志物检测是目前诊断乙型肝炎最常用的指标，主要反映人体对乙肝病毒的免疫反应状态，不同血清标志模式反映不同的临床意义。非传染病专业医师很难准确掌握。因此，采用病毒定量的方法，对乙肝早期诊断、准确判断乙肝患者的带毒状态及药物治疗观察就显得及其重要。

　　1   材料与方法

　　1.1 材料来源   
 
　　Fluo Cycle型核酸扩增荧光检测仪为上海科华实验系统有限公司产品。HBV-DNA荧光定量试剂盒采用上海科华生物工程股份有限公司产品。

　　1.2 质量控制  

　　每次实验各设阴性、阳性、室内质控及标准梯度做对照，严格按照防污染措施进行实验操作。

　　1.3 方法  

　　荧光探针实时检测定量PCR方法。从血清中提取HBV-DNA将其加入反应管，放入扩增仪进行扩增，反应结束后由电脑自动分析结果。

　　1.4 ELISA方法   

　　对同份血清的HBV血清标志物检测用ELISA法。

　　2   结果
    
　　150例乙肝标本中有91例HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性的标本中，FQ-PCR检测HBV-DNA全部阳性，阳性率100％，平均HBV-DNA拷贝数为2.8×106/ml；在40例HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性的标本中，FQ-PCR检测HBV-DNA阳性31例，阳性率77.5%，平均HBV-DNA拷贝数为1.2×104/ml；在19例HBsAg、抗-HBc阳性的标本中，FQ-PCR检测HBV-DNA 18例，阳性率94.7%，平均HBV-DNA拷贝数为4.3×105/m1(见表1)。

　　3   讨论
    
　　FQ-PCR可以准确地为乙型肝炎提供诊断依据，是临床基因诊断的有力手段，FQ-PCR采取闭管方式扩增和检测，从而克服了以前普通PCR的污染问题，且所加入的荧光探针除起到了定量作用外，进一步加强了PCR的特异性检测，实践中设阳性梯度，定量范围极广，ELISA法作为临床诊断HBV感染的传统方法，其反应的是人体对HBV的免疫反应状态，是一种间接的检测手段。而FQ-PCR是直接检测的HBV病毒自身，并且有定量作用，准确的反应了HBV的感染、复制和治疗效果情况。
    
　　荧光PCR反应虽然灵敏度高，但同样存在很多影响因素，包括引物、反应体系、血清抑制物、标本稳定性等，因此，实时荧光定量PCR检测也存在明显的局限性[1,2]，尽管目前许多检测单位建立了室内和室间的质控，但由于抗病毒疗效观察指标是在不同时期进行检测的，因此实验室条件很难一致(即不同的实验室、不同的试剂或同一试剂不同批号以及不同的操作人员等)，故能造成检测结果的一定误差[3]，从而影响疗效评估。

【参考文献】
  　　[1]李金明.聚合酶链反应临床应用的优越性和局限性[J]].中华检验医学杂志,2005,28(30):225.

　　[2] 李金明.定量聚合酶链反应测定应用技术[J].中华检验医学杂志,2002,25(2):123.

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