过继性免疫细胞治疗之CIK细胞疗法

一、何为过继性免疫细胞治疗？何为CIK细胞？

    过继性免疫细胞治疗是指通过回输体外培养扩增的免疫效应细胞，达到放大机体抗肿瘤免疫目的的肿瘤治疗方法，是生物免疫治疗中最为成熟和有效的方法。目前用于回输的免疫效应细胞主要有淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK），肿瘤浸润淋巴细胞（TIL），细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK），树突状细胞（DC），自然杀伤细胞（NK），CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞（CD3AK）等。

   CIK是英文cytokine -induced killer 的缩写，中文译为细胞因子诱导的杀伤细胞。它是将人外周血单个核细胞（PBMC）在体外用多种细胞因子（抗CD3McAb、IL-2、IFN-γ、IL-1α等）共同培养一段时间后获得的一群异质细胞。其中CD3+CD56+细胞是CIK细胞群体中主要的效应细胞，被称为NK样T淋巴细胞，兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC（主要组织相容性复合体）限制性杀瘤优点。

二、CIK细胞抗肿瘤的作用机制？

1、CIK细胞可以直接杀伤肿瘤细胞：CIK细胞可以通过不同的机制识别肿瘤细胞，释放颗粒酶/穿孔素等毒性颗粒，这些颗粒直接穿透封闭的肿瘤细胞膜进行胞吐，从而导致肿瘤细胞的裂解。

2、CIK细胞释放的大量炎性细胞因子具有抑瘤杀瘤作用：体外培养的CIK细胞可以分泌多种细胞因子，如IFN-γ、TNF-α、IL-2等，不仅对肿瘤细胞有直接抑制作用，还可通过调节机体免疫系统反应性间接杀伤肿瘤细胞。

3、CIK细胞能够诱导肿瘤细胞的凋亡：CIK细胞在培养过程中表达FasL（Ⅱ型跨膜糖蛋白）通过与肿瘤细胞膜表达的Fas（Ⅰ型跨膜糖蛋白）结合，诱导肿瘤细胞凋亡。

三、与其它过继性免疫治疗相比，CIK细胞的优势？

1、增殖活性高：在培养的第15天数量就可以达到70多倍，第22天左右达到增殖曲线顶峰，大约为100多倍，其效应细胞CD3+CD56+的比例和数量更是明显增加；

2、杀瘤活性高，而且杀瘤活性的维持不需要外源大量的IL-2的输入来维持；

3、杀瘤谱广：CIK对肾癌、恶性黑色素瘤、白血病、乳腺癌、直肠癌、胃癌、肺癌、食管癌、宫颈癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤（非T细胞淋巴瘤）等恶性肿瘤细胞都有显著的杀伤活性；

4、对多重耐药肿瘤细胞同样敏感；

5、杀瘤活性不受CsA（环孢霉素A）和FK506（普乐可复）等免疫抑制剂的影响；

6、对正常骨髓造血前体细胞毒性很小：约为25%；

7、能抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞Fas-FasL凋亡：CIK细胞内有抗凋亡基因表达，并检出多种保护基因，如Bcl-2等和survivin的转录水平上调。 

四、CIK细胞疗法可用于哪些肿瘤的治疗？对哪几种肿瘤最有效？可用于肿瘤的哪一阶段（期）的治疗？

     由于CIK细胞溶瘤作用是非MHC限制性的，即不受肿瘤组织类型的限制，因此对任何一种肿瘤均有杀灭作用。

     CIK细胞对高抗原表达的肿瘤最为有效，比如恶性黑色素瘤、髓系白血病、肾癌、转移性肾癌、非何杰金氏淋巴瘤等。

    CIK细胞可用于任何一期肿瘤的治疗。

五、CIK细胞疗法临床应用的适应症和禁忌症？

     适应症：①手术后患者，可防止肿瘤转移复发；②无法进行手术、放疗、化疗的中晚期患者；③放疗、化疗失败的患者；④放疗或化疗后患者的综合治疗；⑤骨髓移植后或化疗缓解后的白血病患者；⑥癌性胸、腹腔积液患者。

    禁忌症：①孕妇或者正在哺乳的妇女；② T细胞淋巴瘤患者；③不可控制的严重感染患者；④对IL-2等生物制品过敏的患者；⑤艾滋病患者；⑥正在进行全身放疗、化疗的患者；⑦晚期肿瘤造成的恶病质、外周血象过低患者。

六、CIK细胞疗法的良好临床疗效表现在哪些方面？

   1、解决CT，MRI等影像学手段显示不到、直径0.5厘米以下、在血液中与淋巴系统里的活动着的癌细胞、微小病灶，预防肿瘤复发转移；

   2、与放、化疗联合使用能降低放、化疗的毒副作用和感染率，提高放、化疗的疗效；与分子靶向治疗联合应用，可以提高其疗效；

    3、对于没有机会手术和复发转移的晚期肿瘤病人，通过大量的CIK重复回输，不但能迅速缓解晚期肿瘤患者的症状，提高生存质量（增加食欲、改善睡眠、增强体质等），延长生存期；而且还出现瘤体缩小甚至消失或长期带瘤生存的大量病例。

七、肿瘤患者采用CIK细胞疗法为什么会有效？

   通常情况下，肿瘤与机体防御处于动态平衡状态，而在肿瘤患者体内，其免疫功能特别是细胞免疫功能低下，导致平衡失调，因此肿瘤细胞迅速增殖、播散，疾病呈进行性发展，预后很差。体外扩增的大量活化CIK细胞输入患者体内后，一方面能够迅速执行杀伤肿瘤细胞的功能，其半衰期可持续2周到1个月；另一方面通过整个免疫网络的激活，调整宿主的防御机制，达到控制肿瘤生长乃至使其消退的目的；最后，一部分记忆细胞在体外也得到了扩增，一旦遇到新的肿瘤细胞出现，能够迅速在体内活化，杀伤靶细胞。

八、CIK细胞是如何制备的？加入CIK细胞培养体系中各细胞因子的作用？

   无菌采集外周抗凝血20～50ml→制备外周血单个核细胞（PBMC）→顺次加入IFN-γ、抗CD3McAb、IL-2、IL-1α细胞因子诱导产生CIK→CIK细胞体外大量扩增培养→收获CIK细胞。

   IFN-γ作用是上调PBMC细胞膜表面IL-2受体表达；抗CD3McAb模拟生理配体体外激活静止T细胞，使之大量增殖，表达IL-2受体，产生内源性 IL-2；IL-2俗称淋巴细胞生长因子，能够促进CIK细胞大量增殖；IL-1α能增强CIK细胞的毒性。

九、CIK细胞如何回输病人体内？以及回输后的处理？

   通过输血器静脉将CIK细胞悬液输给患者，输注时间>30min，输CIK当天起每日给予IL-2 50-100万IU，连续2-5天。

十、CIK疗法的不良反应及处理？

   对于自体CIK细胞治疗，CIK细胞是诱导、激活的自体细胞，这种治疗相当安全，一般没有严重的不良反应。CIK 细胞治疗中可能出现的主要毒副作用是寒战、发热、乏力。发热常常出现在治疗后4～8 h，体温一般38℃左右，发热在2～4 h 内常可缓解，不需特殊处理。对体温超过39℃ 的患者可用退热药解除症状。极少数患者可能出现恶心等消化道症状，个别患者可见皮疹等过敏反应，给予对症处理可缓解症状。对于异体CIK细胞治疗，可能会发生极为罕见的移植物抗宿主反应。

十一、患者进行CIK细胞治疗的治疗方案？需治疗几个疗程才有效？何时需要重复加强？

   CIK生物治疗的疗程及疗程间隔取决于以下几个方面：

   1、免疫情况（年龄、体质、精神压力、营养、其他疾病等）；

   2、临床分期与病灶情况（肿瘤大小、转移情况等）；

   3、个体化生活习惯差异（饮食、睡眠、工作、运动等）；

   4、已接受或计划接受的癌症治疗方法（手术、放、化疗等）；

   5、阶段性疗效评估 (血象与影像学报告等)；

   6、经济能力；

   7、患者与家属对治疗目标疗效的期望与共识。

               临床应用参照表

   对于普通型CIK细胞治疗，患者平均每周采血1次，每次20～30ml。从采血开始分离培养时间计，第8～12天开始输注CIK 细胞，每周2～3 次。每次输注的细胞数不 < 1×109，整个疗程不<1×1010个细胞。

   对于增强型CIK细胞治疗，患者每两周采血1次，每次50ml，从采血开始分离培养时间计，第14天给予输注CIK细胞，每次数量不<1×1010个细胞。

十二、如何使CIK细胞疗法发挥更大疗效？

   在CIK 细胞治疗过程中，输入细胞的疗程采用“细水长流”式长期治疗，即普通型或“重点投入”式治疗，即增强型，需要因人和病情不同而异，需要严格评价和分析患者的身体状况和肿瘤的发展势头，特别是CIK 治疗与其他治疗方法的联合。

十三、异体+自体CIK细胞治疗的适应症？操作流程？不良反应？

   对于免疫功能极其低下的中晚期患者，由于其体内CIK前体细胞数量少，导致体外扩增难度大，获得的细胞数量少，活性低，难达到治疗效果，所以建议先进行异体CIK细胞治疗，待患者体质恢复一定程度后，再行自体CIK细胞治疗。具体操作为先动员患者的直系亲属进行乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒病原学检测，合格后捐献20～30ml抗凝血，我们在体外扩增培养，然后回输患者体内。可能会出现极为罕见的移植物抗宿主反应，其它不良反应见自体CIK细胞治疗。

十四、CIK细胞疗法收费标准？

   CIK细胞疗法的收费是根据广东省物价局、广东省卫生厅2006年6月颁布的《中央、军队、武警、省属驻穗非营利性医疗机构服务价格》中规定而定的，3000元/2次（普通型）（编号：310800024）。增强型的收费为12000元/次。

十五、CIK细胞应用前景展望？

   早在2000年美国“国际肿瘤生物/免疫治疗及基因治疗”年会总结报告中就指出：“生物治疗是目前知道的唯一一种有望完全消灭癌细胞的治疗手段，21世纪是肿瘤生物治疗的时代”。CIK细胞疗法更是具有广泛的发展前景，可以与DC或者NK细胞联合应用，增加靶向性及杀瘤活性；可以通过基因修饰的方法，将IL-2、G-gp等基因转染至CIK细胞内，增加其活性；可以通过不断优化CIK体外扩增体系，增加CIK细胞的数量及活力。

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